مطالعه رنگ‌آمیزی میلوپراکسیداز تشخیص بیماری‌های خونی را بهبود می‌بخشد

رنگ آمیزی مایلوپروکسیداز (MPO) ، همچنین به عنوان رنگ آمیزی پروکسیداز لکوسیت (POX) شناخته می شود، یک روش رنگ آمیزی سایتوشیمی است که به طور گسترده مورد استفاده قرار می گیرد.این روش فعالیت پروکسیداز درون سلولی را برای کمک به تشخیص اختلالات خون شناسی تشخیص می دهد.، به خصوص در طبقه بندی سرطان خون.

رنگ آمیزی MPO بر واکنش کاتالیستی پروکسیداز درون سلولی متکی است. این آنزیم اکسید ها را تجزیه می کند تا اکسیژن تولید کند که سپس با یودید پتاسیم واکنش نشان می دهد تا یود ایجاد کند.یود با رنگ رایت-گیمسا ترکیب می شود، ایجاد دانه های رنگی در سیتوپلاسم که توزیع پروکسیداز را تحت میکروسکوپ نشان می دهد. انواع مختلف سلول دارای محتوای مختلف پروکسیداز و الگوهای توزیع متفاوت هستند،اجازه می دهد که رنگ گذاری MPO بین آنها تمایز ایجاد کند.

رنگ آمیزی استاندارد MPO نیاز به کیت های خاص واکنشگر برای اطمینان از دقت و قابلیت اطمینان دارد. یک کیت معمولی شامل:

• محلول A: محلول ایوزین- یک رنگ اسیدی که سایتوپلاسم را قرمز یا صورتی می کند
• راه حل ب: Azure II- يک رنگ بنيادي که هسته ها رو به رنگ آبي يا بنفش رنگ ميده
• راه حل C: پوتاسیوم یودید PBS بافر- حاوی بستر واکنش پروکسیداز است و ثبات pH را حفظ می کند.
• راه حل D: رنگ رایت-گیمسا-يه رنگ دو منظوره که مورفولوژي سلولي رو ارتقا ميده

کیت ها در اندازه های مختلف (5 آزمایش، 20 آزمایش و 100 آزمایش) برای پاسخگویی به نیازهای آزمایشگاهی مختلف در دسترس هستند.

1. آماده سازی محلول کاری: محلول C را با محلول D مخلوط کنید (معمولا نسبت 1.0ml: 250μl).
2. تثبيت روغن: نمک استخوان یا خون آماده شده را با متانول یا اتانول برای ۵ تا ۱۰ دقیقه ثابت کنید.
3. رنگ آمیزی: روغن های ثابت را به مدت ۵ تا ۱۰ دقیقه در محلول کاری غوطه ور کنید و درجه حرارت و رطوبت را کنترل کنید.
4. شستشو: به آرامی با آب تقطیر شده یا بافره PBS بشویید تا لکه های اضافی را از بین ببرید.
5. ضد رنگ کردن(اختیاری): برای افزایش کنتراست هسته ای از هماتوکسیلین استفاده کنید.
6. خشک کردن: خشک کردن با هوا یا استفاده از خشک کن.
7. میکروسکوپی: بررسی رنگ های رنگ شده برای ارزیابی فعالیت و توزیع پروکسیداز.

تفسیر نتایج نیاز به تخصص دارد. یافته های رایج عبارتند از:

• واکنش مثبت: دانه های سایتوپلاسمک قرمز قهوه ای تا آبی تیره (ضعیف در مقابل مثبت قوی). دانه ها ممکن است کل سایتوپلاسم را پوشش دهند یا هسته را پنهان کنند.
• واکنش منفی: سیتوپلاسم آبی بدون دانه ها و هسته های قرمز بنفش یکنواخت
• اوزینوفیل ها: رنگ های آبی تیره شدید را نشان می دهند، گاهی اوقات با بلورهای شبیه سوزن خارج از سلول.

• طبقه بندی سرطان خون: میلوئید (MPO- مثبت) را از لنفویید (MPO- منفی) تشخیص می دهد و تصمیمات درمانی را هدایت می کند.
• تشخیص سرطان خون میلوئید حاد (AML): منشاء میلوئید را تایید می کند و کمک به زیرنوع سازی می کند، با نرخ های مثبت متفاوت که نشان دهنده زیرنوع های مختلف AML است.
• ارزیابی سندرم میلودیسپلاستیک (MDS): رشد و تمایز سلولی را ارزیابی می کند، با الگوهای MPO غیرطبیعی که MDS را نشان می دهد.
• سایر اختلالات خون شناسی: در تشخیص سرطان خون مزمن میلوئید و میلوفیبروز مفید است.

• کیفیت و شرایط نگهداری واکنش دهنده
• پيروي سختي از پروتکل
• آماده سازی مناسب لیزر
• حداکثر مدت رنگ گذاری
• ارزیابی میکروسکوپی متخصص توسط پاتولوژیست

پیشرفت های تکنولوژیکی به بهبود رنگ گذاری MPO ادامه می دهد. ایمنی هیستوشیمی در حال حاضر MPO را با نشانگرهای ایمنی برای دقت بیشتر ترکیب می کند، در حالی که سلول سنجی جریان تشخیص کمی MPO را امکان پذیر می کند.در حالی که این روش سنتوشیمی کلاسیک در حال تکامل است، وعده می دهد که کمک های بیشتری به تشخیص و درمان خون شناسی داشته باشد.